一、浴室供暖锅炉母种的制备

　　用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种（保留种，并用于生产的母种即为生产母种），可用于扩接原种。

　　1．培养基配方

　　配方一　综合马铃薯培养基

　　马铃薯200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0.5克　　

　　维生素B110毫克琼脂20克水1000毫升PH值自然

　　配方二　合成培养基

    马铃薯20克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋白胨10克牛肉膏5克

　　酵母膏5克硫酸镁0.8克水1000毫升PH值自然

　　2．培养基制作方法

　　先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。

　　培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4。装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。

　　3．灭菌

　　将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下(锅入温度达121℃)灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。

　　4．接种、培养

　　通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，12—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。

    二、原种的制备

　　母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。

　　1．培养基配方

　　配方一　木屑麸皮培养基

　　阔树木78%、麸皮20%、糖1%、石膏粉1%、水65%、PH值自然

　　配方二　棉籽壳木屑混合培养基

　　棉籽壳90%、糖1%、麸皮5%、过磷酸钙3%、石膏粉1%、PH值自然

　　2．拌料与装袋

　　选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1：1、3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。堆闷30分钟后，装瓶(袋)。用机械或人工装袋稍加压实。塑料袋规格通常为袋宽9厘米，长21厘米，单层厚0.04厘米，在袋口外套入塑料环，形成象瓶子一样，然后在袋口内塞松紧适宜棉塞、或用牛皮纸包扎好。

　　原种灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌原理：在高温(120℃)、高压(1公斤/厘米2)条件下灭菌2－3小时，将芽孢在内的微生物全部杀死。常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在90－103℃之间，其热力、穿透力不强，在一定温度下维持足够时间达到灭菌目的，通常在100℃下维持8－10小时。

　　4．接种与培养

　　不论用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0.2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶(袋)放入接种箱内或接种室内，用紫外线灯照射30分钟后，在无菌条件下进行接种，或在接种前用烟雾剂密闭薰蒸消毒。即烟雾剂点燃消毒时应关闭门窗。接种室消毒，一间房需点燃3盒50克规格烟雾剂；接种箱消毒每次仅用重量为40克，但又细分为20包的其中2包点燃即可(每包2克)。一般18×180厘米，母种试管每支可接4—6瓶(袋)原种。将接种后的菌种瓶(袋)放入发菌室培养。以培养室温度22－26℃，相对湿度为80%以下，光线为弱散射光，发菌期间应保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶(袋)需30—40天。