1．食用菌灭菌锅炉斜面低温保藏法

将菌种接种在适合的固体斜面培育基上，待菌充沛成长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

保藏时刻依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。

此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，长处是操作简略，运用方便，不需特别设备，能随时查看所保藏的菌株是否逝世、变异与污染杂菌等。缺陷是简略变异，因为培育基的物理、化学特性不是严厉稳定的，多次传代会使微生物的代谢改动，而影响微生物的性状；污染杂菌的时机亦较多。

 2．液体白腊保藏法

（1）将液体白腊分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。

（2）将需求保藏的菌种，在最适合的斜面培育基中培育，使得到强健的菌体或孢子。

（3）用灭菌吸管汲取灭菌的液体白腊，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准（图Ⅶ-12），使菌种与空气隔绝。

（4）将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时刻还要长）。

此法有用而作用好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，乃至用一般办法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保藏3个月之久。此法的长处是制造简略，不需特别设备，且不需常常移种。缺陷是保存时有必要直立放置，所占方位较大，同时也不方便带着。从液体白腊下面取培育物移种后，接种环在火焰上炙烤时，培育物简略与残留的液体白腊一同飞溅，应特别留意。

3．滤纸保藏法

（1）将滤纸剪成0．5×1．2cm的小条，装入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2张，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟。

（2）将需求保存的菌种，在适合的斜面培育基上培育，使充沛成长。

（3）取灭菌脱脂牛乳1—2ml滴加在灭菌培育皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。

（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的枯燥器中，用真空泵抽气至干。

（6）将棉花塞入管内，用火焰按图Ⅶ-13熔封，保存于低温下。

（7）需求运用菌种，复生培育时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃决裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管敞开后，取出滤纸，放入液体培育基内，置温箱中培育。

细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌乃至可保藏14—17年之久。此法较液氮、冷冻枯燥法简洁，不需求特别设备。

4．沙土保藏法

（1）取河沙参加10％稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其间的有机质。

（2）倒去酸水，用自来水冲刷至中性。

（3）烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。

（4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗刷数次，直至中性。

（5）烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。

（6）按一份黄土、三份沙的份额（或根据需求而用其他份额，乃至可悉数用沙或悉数用土）掺合均匀，装入10×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌，烘干。

（7）抽样进行无菌查看，每10支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培育基中，37℃培育48小时，若仍有杂菌，则需悉数从头灭菌，再作无菌实验，直至证明无菌，方可备用。

（8）选择培育老练的（一般指孢子层成长饱满的，养分细胞用此法作用欠好）优秀菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。

（9）于每支沙土管中参加约0．5ml（一般以刚刚使沙土潮湿为宜）孢子悬液，以接种针拌匀。

（10）放入真空枯燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时刻越短越好，务使在12小时内抽干。

（11）每10支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培育基上，进行培育，调查成长状况和有无杂菌成长，如呈现杂菌或菌落数很少或底子不长，则阐明制造的沙土管有问题，尚须进一步抽样查看。

（12）若经查看没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内枯燥处保存。每半年查看一次生机和杂菌状况。

（13）需求运用菌种，复生培育时，取沙土少量移入液体培育基内，置温箱中培育。

此法多用于能发生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因而在抗生素工业出产中使用最广，作用亦好，可保存2年左右，但使用于养分细胞作用欠安。